Padronização de uma técnica de congelamento de sêmen em cães

Abstract

Várias pesquisas têm sido desenvolvidas com o intuito de melhorar a técnica da criopreservação de sêmen em cães. O objetivo deste trabalho foi estabelecer o meio diluidor de congelamento do sêmen canino mais adequado para um protocolo de congelamento realizado em máquina computadorizada, além de otimizar a temperatura de descongelamento. Foram usados cinco cães e coletados três ejaculados/animal. Foram testados os meios Tris-cítrico (G1), Lactose-gema (G2) e INRA 82 (G3) com 5% de glicerol. Alíquotas de sêmen foram diluídas em cada meio e foram congeladas em máquina computadorizada programada para realizar uma curva de resfriamento de -0,5ºC/min, de 25-29ºC até 5ºC, período de equilíbrio de 1h a 5ºC, seguida da curva de congelamento de -20ºC/min, de 5ºC até -120ºC. Foram testadas duas temperaturas de descongelamento: A) 37ºC/30s e B) 52ºC/10s, seguida de 37ºC/30s. Os espermatozóides foram avaliados quanto à motilidade progressiva, morfologia, reatividade ao teste hiposmótico e integridade de membranas avaliadas pelo uso de fluorescência (CFDA/IP). Os meios de congelamento Tris-cítrico e Lactose-gema foram superiores ao meio INRA quanto aos parâmetros de motilidade e morfologia espermática (p<0,05). Não houve diferença entre eles quanto à manutenção da integridade funcional e estrutural das membranas espermáticas (p>0,05). O descongelamento a 52ºC resultou no aparecimento de maior porcentagem de anormalidades acrossomais que o descongelamento a 37ºC (p<0,05). Com base nos resultados, pode-se concluir que os meios Triscítrico e Lactose-gema preservaram melhor a viabilidade espermática após o descongelamento a 37ºC/30s na curva de resfriamento de -0,5ºC/min e de congelamento de -20ºC/min.